PEMANFAATAN IMMUNOSTIMULAN UNTUK PENGENDALIAN PENYAKIT PADA IKAN MAS. Abstrak

Transkripsi

1 PEMANFAATAN IMMUNOSTIMULAN UNTUK PENGENDALIAN PENYAKIT PADA IKAN MAS E. Mudjiutami, Ciptoroso, Z. Zainun, Sumarjo, Rahmat Abstrak Koi Herpes Virus (KHV) merupakan penyakit virus yang menyerang ikan mas dan koi sejak tahun 2002 hingga sekarang yang menyebabkan produksi ikan mas di Indonesia mengalami kelesuan. Berbagai upaya pencegahan telah diteliti dan dikembangkan serta diterapkan di lapangan dengan tujuan untuk meningkatkan daya tahan tubuh ikan mas, mengingat obat tidak dapat digunakan secara efektif untuk pengendalian penyakit ini. Salah satu bahan immustimulan yang berpotensi untuk digunakan dalam pengendalian penyakit ini adalah Chromium yeast (Cr-yeast) yang diaplikasikan melalui pakan. Bahan ini biasanya digunakan sebagai pencampur pakan pada hewan ternak, yang diharapkan dapat berdampak positif juga bagi pertahanan tubuh ikan Pemanfaatan Cr-yeast yang dicampurkan dalam pakan telah dilakukan di Balai Besar Pengembangan Budidaya Air Tawar (BBPBAT) pada tahun dengan tujuan untuk meningkatkan daya tahan ikan mas dalam rangka pengendalian Koi Herpes Virus (KHV) dan menekan mortalitas akibat KHV. Kegiatan dilakukan di Cirata, Cianjur dengan wadah berupa Karamba Jaring Apung (KJA) dengan ukuran (3x3)m2 sebanyak 12 buah. Perlakuan yang digunakan adalah. penggunaan Cr-yeast dalam pakan selama pemeliharaan (A), penggunaan Cr-yeast selang 2 minggu (B), penggunaan Cr-yeast selang 1 minggu (C) dan tanpa penggunaan Cr-yeast (D). M asing-masing perlakuan diaplikasi dengan 3 kali ulangan. Ikan yang digunakan adalah ikan mas dengan ukuran 10 gram per ekor dengan padat tebar 1000 ekor/kja. Dosis pakan yang diberikan adalah 3 %/berat biomas dengan lama pemeliharaan 3 bulan. Uji tantang dilakukan di laboratorium menggunakan filtrat virus KHV terhadap 10 ekor ikan mas setelah perlakuan, dan pengamatan dilakukan pula terhadap gambaran darah ikan mas. Hasil kegiatan menunjukkan Cr-yeast memberikan respon positif terhadap sintasan pemeliharaan maupun sintasan setelah uji tantang. Sintasan pemeliharaan ikan mas untuk masing-masing perlakuan A, B, C dan D secara berurutan adalah: 77.70%, 74.50%, 67.80% dan 54.30%. Sedangkan sintasan setelah uji tantang berturut-turut adalah: 76.66%, 63.33%, 50.00% dan 20.00%. Respon tanggap kebal terhadap KHV juga ditunjukkan melalui gambaran darah ikan mas uji. Kata Kunci: immunostimulan, KHV, ikan mas PENDAHULUAN Latar Belakang Koi Herpes Virus (KHV) merupakan penyakit virus yang menyerang ikan mas dan koi. Sejak terjadinya wabah ikan mas yang disebabkan oleh KHV pada tahun 2002 produksi ikan mas di Indonesia mengalami kelesuan hingga sekarang. Infeksi KHV yang bermula terjadi di pulau Jawa telah menyebar ke Bali, Sumatera, dan Kalimantan Selatan. Bahkan pada tahun 2005 kasus KHV telah menyerang ikan mas pada kegiatan budidaya ikan di danau Toba, yang kemudian diikuti dengan adanya larangan untuk mengirimkan ikan mas ke pulau Sumatera yang merupakan kawasan karantina. Infeksi KHV ditandai terutama oleh adanya bercak merah atau kerusakan insang serta kematian masal pada ikan yang terserang. Selain itu biasanya diikuti oleh adanya infeksi sekunder berupa luka atau bercak putih di permukaan tubuh yang diinfeksi oleh bakteri seperti Aeromonas hydrophila ataupun Flexibacter columnaris. Hingga kini penyakit virus sulit untuk diberikan perlakuan pengobatan karena virus berada didalam inti sel. Untuk itu upaya pencegahan untuk meningkatkan daya tahan tubuh ikan menjadi salah satu alternatif pengendalian. Immunostimulan adalah suatu zat yang termasuk dalam adjuvant, mempunyai kemampuan untuk meningkatkan ketahanan tubuh terhadap infeksi 1

2 Jurnal Budidaya Air Tawar Volume 4 No. 1 Mei 2007 (1-9) (Ellis, 1988). Penggunaan immunostimulan pada budidaya ikan merupakan sesuatu yang baru bagi kesehatan ikan dan pencegahan terhadap penyakit (Anderson dalam Saptiani, 1996). Berbagai jenis immunostimulan dapat digunakan, salah satunya adalah Chromium yeast, yang berfungsi juga untuk mengatasi stres. Bahan ini biasanya digunakan sebagai pencampur pakan pada hewan ternak, yang diharapkan dapat berdampak positif juga bagi pertahanan tubuh ikan. Tujuan Kegiatan ini bertujuan untuk meningkatkan daya tahan ikan mas dalam rangka pengendalian Koi Herpes Virus (KHV) dan menekan mrtalitas akibat KHV. Target Memperoleh informasi teknologi peningkatan daya tahan tubuh ikan mas terhadap penyakit KHV dalam rangka pengendalian penyakit. Metode Persiapan Persiapan dilakukan pada wadah berupa KJA berukuran 3x3x3 m 3 dan peralatan bahan lain yang diperlukan Pembuatan pakan yang dicampur dengan Chromium yeast (Cr-yeast). Pelaksanaan Pemeliharaan Ikan Penebaran ikan mas sebanyak 1000 /KJA dilakukan pada 12 KJA yang digunakan. Perlakuan yang digunakan adalah: Penggunaan Cr-yeast dalam pakan selama pemeliharaan (A), penggunaan Cr-yeast selang 2 minggu (B), penggunaan Cr-yeast selang 1 minggu (C) dan tanpa penggunaan Cr-yeast (D). Masing-masing perlakuan diaplikasi dengan 3 kali ulangan Pemberian pakan dilakukan dengan dosis 3 % Lama pemeliharaan : 3 bulan Sampling bobot dilakukan setiap 2 minggu Sampling ikan untuk pemeriksaan KHV dilakukan 1 bulan sekali. METODOLOGI Waktu dan Tempat Kegiatan ini dilakukan pada bulan Januari- Desember 2005 di KJA Cirata, Cianjur Bahan dan Alat Bahan yang digunakan pada kegiatan ini adalah bahan immunostimulan (Chromium yeast) serta bahan analisa mikrobiologi dan analisa virus KHV. Ikan uji yang digunakan berupa ikan mas bebas KHV yang berukuran 10 gram sebanyak ekor. Sedangkan peralatan yang digunakan adalah peralatan perikanan seperti ember, lambit dan sebagainya, peralatan mikrobiologi dan peralatan untuk analisa virus KHV. Alat yang digunakan pada kegiatan ini adalah karamba jaring apung yang berukuran 3x3x3 m 3 sebanyak 12 buah di Cirata, Cianjur. Uji Tantang Uji tantang terhadap virus KHV dilakukan setelah selesai pemeliharaan ikan dilakukan jika tidak infeksi alami virus KHV selama pemeliharaan Pelaksanaan uji tantang tidak dilakukan pada semua ikan yang dipelihara tapi 10 ekor ikan per perlakuan Uji tantang dilakukan di bak akuarium yang berada di laboratorium terkontrol di BBPBAT. Pengamatan Gambaran Darah Pengamatan gambaran darah dilakukan selama pemeliharaan pada hari ke-0, ke-14, ke-21 serta hari ke-28, dan setelah infeksi virus pada uju tantang pada hari ke-7, ke-14 dan hari ke-28. Parameter yang diamati dan dianalisa adalah kadar hematokrit, total leucosit dan indeks fagositik. 2

3 HASIL DAN PEMBAHASAN Pemeriksaan Virus KHV Pada Awal Pemeliharaan Ikan mas yang digunakan untuk kegiatan diperiksa PCR terlebih dahulu untuk mengetahui infeksi KHV. Pengambilan sampel dilakukan secara acak sebanyak 30 ekor dari populasi ikan. Hasil pemeriksaan PCR menunjukkan bahwa ikan yang digunakan adalah positif KHV yang berarti ikan sudah terinfeksi KHV. Penggunaan benih bebas KHV sangat sulit didapatkan mengingat virus KHV sudah menyebar hampir ke seluruh wilayah Indonesia, sehingga benih yang digunakan adalah benih yang secara alami sudah terinfeksi KHV. Benih ikan mas yang digunakan rata-rata berukuran 10 g. Selanjutnya ikan mas dipelihara selama 3 bulan sesuai perlakuan. Selama Pemeliharaan Pemeriksaan virus KHV juga dilakukan setiap bulan sekali selama 3 bulan. Hasil pemeriksaan menunjukkan bahwa ikan pada semua perlakuan tetap terinfeksi KHV. Sintasan Sintasan ikan mas selama 3 bulan masa pemeliharaan ditunjukkan pada Tabel 2. Tabel 2. Sintasan Ikan Mas Selama 3 Bulan Masa Pemeliharaan (%) PERLAKUAN ULANGAN RERATA ± SDEV A ± 2.52 B ± 2.29 C 69, ± 2.47 D ± 7.77 Tabel 3. Pertumbuhan Panjang Ikan Mas Selama Pemeliharaan (cm) PERLAKUAN PANJANG IKAN PADA SAAT SAMPLING (cm) PERTUMBUHAN (cm) AWAL 1 BLN 2 BLN 3 BLN A A A Rataan ± SDev 9.66 ± ± ± ± ±0.44 B B B Rataan ± SDev 10.19± ± ± ± ±0.90 C C C Rataan ± SDev 9.62± ± ± ± ± 0.31 D D D Rataan ± SDev 9.47± ± ± ± ±

4 Jurnal Budidaya Air Tawar Volume 4 No. 1 Mei 2007 (1-9) PERLAKUAN Tabel 4. Pertumbuhan Bobot Ikan Mas Selama Pemeliharaan (g) BOBOT IKAN PADA SAAT SAMPLING (g) PERTUMBUHAN (g) AWAL 1 BLN 2 BLN 3 BLN A A A Rataan ± SDev ± ± ± ± ± 4.83 B B B Rataan ± SDev 16.07± ± ± ± ± 2.31 C C C Rataan ± SDev 12.52± ± ± ± ±1.07 D D D Rataan ± SDev 12.18± ± ± ± ±2.03 Tabel 5. Rataan Kadar Hematokrit selama Pemeliharaan Sebelum Infeksi Virus dan Setelah Infeksi Virus pada Uji Tantang PERLAKUAN ULANGAN SEBELUM INFEKSI VIRUS SETELAH INFEKSI VIRUS H 0 H +14 H +21 H+28 H +7 H +14 H +21 A Rerata B Rerata C Rerata D Rerata Keterangan: H0 : awal pemeliharaan H+14 : hari ke-14 H+21 : Hari ke-21 H+28 : hari ke-28 4

5 Tabel 2 menunjukkan bahwa perlakuan A (pemberian Chromium Yeast secara kontinyu selama masa pemeliharaan) menghasilkan sintasan tertinggi sebesar 77.7 ± 2.52 %, diikuti perlakuan B (pemberian Chromium Yeast 2 minggu sekali) 74.5 ± 2.29%, perlakuan C (pemberian Chromium Yeast 1 Rataaan hematokrit (%) A B C D minggu sekali) 67.8 ± 2.47%, perlakuan D (kontrol) INF 14INF 21INF 54.3 ± 7.77%. Hari pengamatan Pemberian Chromium Yeast berpengaruh positif terhadap sintasan ikan mas. Pertumbuhan Data pertumbuhan panjang ikan mas masingmasing perlakuan disajikan pada Tabel 3, sedangkan data pertumbuhan berat pada Tabel 4. Berdasarkan tabel 3, terlihat bahwa pertumbuhan panjang rata-rata tertinggi adalah perlakuan A, diikuti perlakuan B, C dan D. Namun demikian, relatif tidak berbeda. Berdasarkan tabel 4, terlihat bahwa pertumbuhan berat rata-rata tertinggi adalah perlakuan A, diikuti perlakuan B, C dan D. Namun demikian, relatif tidak berbeda. Hematokrit Hematokrit merupakan perbandingan antara volume sel darah dan plasma darah. Hasil pengamatan kadar hematokrit disajikan pada Gambar 1. Berdasarkan tabel 4, terlihat bahwa persentase hematokrit cenderung mengalami peningkatan baik pada perlakuan maupun kontrol sebelum infeksi. Kisaran persentase hematokrit sebelum infeksi pada perlakuan A %, B %, C %, D %. Sedangkan persentase hematokrit setelah infeksi secara umum mengalami penurunan baik pada perlakuan maupun kontrol. Persentase hematokrit setelah infeksi pada perlakuan A %, B %, C %, D %. Gambar 1. Grafik Pengamatan Kadar Hematokrit Berdasarkan hematokrit yang diperoleh selama kegiatan persentase hematokrit sebelum infeksi pada perlakuan relatif tidak berbeda dengan kontrol. Hal ini menunjukkan bahwa penggunaan Chromium yeast sebagai immunogenik tidak berdampak negatif pada kondisi ikan sehingga layak digunakan sebagai immunostimulan. Menurut Kwang (1996)sejauh ini pemberian immunostimulan tidak mempunyai efek samping. Nilai hematokrit ini berhubungan dengan jumlah sel darah merah (Bond, 1979), nilai selalu berubah-ubah tergantung kepada faktor nutrisi dan umur (Randall, 1970). Lebih lanjut dijelaskan oleh Ferguson (1988), nilai hematokrit variasinya tinggi karena sangat dipengaruhi oleh umur, jenis kelamin, waktu pemeriksaan, temperatur air, metode sampling, tipe dan lama anestesi. Gambar 1 menunjukkan bahwa nilai hematokrit setelah infeksi mengalami penurunan pada semua perlakuan. Penurunan nilai hematokrit ini mengindikasikan bahwa ikan terkena infeksi. Sesuai pendapat Wedemeyer dan Yasutake (1977), menurunnya kadar hematokrit dapat dijadikan petunjuk mengenai rendahnya kandungan protein, defisiensi vitamin atau ikan mendapatkan infeksi. Total Leukosit Hasil perhitungan total leukosit disajikan pada Tabel 6 dan Gambar 2. 5

6 Jurnal Budidaya Air Tawar Volume 4 No. 1 Mei 2007 (1-9) Rataan jumlah leukosit (sel/mm3) A B C D A 7A 14A 28A 7INF 14INF 21INF Hari pengamatam Gambar 2. Grafik Pengamatan Total Leukosit Sebelum Dan Setelah Infeksi Berdasarkan Tabel 6, terlihat bahwa total leukosit sebelum infeksi pada perlakuan A berkisar sel/mm 3, B sel/mm 3, C sel/mm 3, D sel/mm 3. Kisaran total leukosit pada semua perlakuan A, B, C maupun D masih dalam kondisi normal. Rastogi (1977), menyatakan jumlah leukosit ikan sekitar sel/mm 3 darah, memiliki satu inti, dua inti atau lebih. Secara umum, semua perlakuan baik A, B,C maupun D menunjukkan adanya peningkatan jumlah leukosit. Namun demikian, peningkatan tertinggi diperoleh oleh perlakuan A, diikuti B, C dan terendah D. Peningkatan jumlah leukosit pada perlakuan A, B dan C yang lebih tinggi daripada perlakuan D (kontrol) menunjukkan bahwa pemberian Cr yeast memberikan efek positif terhadap peningkatan total leukosit.gudkovs (1988), yang menyatakan bahwa karakteristik respon non spesifik, satu diantaranya ditandai adanya migrasi dari leukosit ke dalam jaringan. Leukosit merupakan salah satu komponen darah yang berfungsi sebagai pertahanan non spesifik yang akan melokalisasi dan mengeliminir patogen melalui pagositosis (Anderson, 1992). Tabel 6. Hasil Perhitungan Rata-Rata Total Leukosit (sel/mm 3 ) selama Pemeliharaan Sebelum Infeksi Virus dan Setelah Infeksi Virus pada Uji Tantang PERLAKUAN ULANGAN SEBELUM INFEKSI VIRUS SETELAH INFEKSI VIRUS H 0 H+14 H+21 H+28 H +7 H +14 H +21 A Rata-rata B Rata-rata C Rata-rata D Rata-rata Keterangan: H0 : awal pemeliharaan H+14 : hari ke-14 H+21 : Hari ke-21 H+28 : hari ke-28 6

7 Gambar 2 menunjukkan bahwa total leukosit setelah infeksi pada semua perlakuan A,B, C dan D mengalami penurunan. Penurunan leukosit ini menunjukkan bahwa ikan mengalami infeksi, sehingga leukosit yang berfungsi sebagai pertahanan non spesifik digunakan untuk melokalisasi dan mengeliminir patogen melalui pagositosis. Anderson (1992), menyatakan leukosit merupakan salah satu komponen darah yang berfungsi sebagai pertahanan non spesifik yang akan melokalisasi dan mengeliminir patogen melalui pagositosis. Indeks Pagositik Berdasarkan tabel 6, terlihat bahwa indeks fagositosis pada perlakuan A, B dan C sebelum infeksi lebih tinggi dibandingkan perlakuan D (kontrol). Hal ini menunjukkan bahwa pemberian Chromium yeast mampu meningkatkan indeks pagositosis. Meningkatnya indeks pagositosis menunjukkan adanya peningkatan kekebalan tubuh, sebagaimana diungkapkan Brown (2000), yang menyatakan peningkatan kekebalan tubuh dapat diketahui dari peningkatan aktivitas sel fagosit dari hemosit. Sel fagosit ini berfungsi untuk melakukan fagositosis terhadap benda asing yang masuk ke dalam tubuh inang. Fagositosis adalah ingesti bahan partikel terutama bakteri ke dalam sitoplasma sel darah. Pola peningkatan prosentase indeks pagositik ini merupakan fungsi dari peningkatan total leukosit maupun presentasi jenis leukosit masing-masing pada limfosit, monosit dan neutrofil (Amrullah, 2005). Menurut Fletcher (1982) dan Walczak (1985), ikan seperti juga pada mamalia, sel yang berfungsi untuk memfagositosis adalah neutrofil granulosit dan mononukear fagosit. Penghancuran kuman oleh fagositosis, terjadi dalam beberapa tingkat yaitu kemotaksis dimana sel sel fagositosis mendekati mikroorgaisme, kemudian menangkap, memakan (fagositosis), membunuh dan mencerna (Baratawijaya, 1991). Proses fagositosis menurut Spector (1993) terjadi apabila kontak antara partikel dengan permukaan sel fagositosis. Membran sel kemudian mengalami invaginasi dimana dua lengan sitoplasma menelan partikel sehingga terkurung dalam sitoplasma sel, terletak dalam vakuola yang dilapisi membran (fagosom). Lisosom yang ada di dekatnya melebur ke dalam fagosom dan mengeluarkan enzim-enzim membentuk fagolisosom atau lisosom sekunder sehingga bakteri atau partikel tersebut mati dan hancur dalam sel fagositosis tersebut. Tabel 6 juga menunjukkan bahawa indeks pagositosis setelah uji tantang mengalami penurunan baik pada perlakuan maupun kontrol. Penurunan aktivitas fagositik diduga karena adanya infeksi virus KHV yang menyebabkan beban kerja sel fagositik menjadi lebih besar, sehingga kemampuan memfagositosis bakteri secara invitro menjadi menurun. Selain itu, penurunan aktivitas pagositik juga diduga karena jumlah sel neutrofil yang aktif mungkin mengalami penurunan, yang menurut (Tizard, 1988), kerja neutrofil cepat tetapi tidak tahan lama, sedangkan fagositik mononukear kerjanya lambat, dapat memfagositik berulang-ulang dan dapat mengolah antigen untuk proses tanggap kebal. Tabel 6 juga menunjukkan bahawa indeks pagositosis setelah uji tantang mengalami penurunan baik pada perlakuan maupun kontrol. Penurunan aktivitas fagositik diduga karena adanya infeksi virus KHV yang menyebabkan beban kerja sel fagositik menjadi lebih besar, sehingga kemampuan memfagositosis bakteri secara invitro menjadi menurun. 7

8 Jurnal Budidaya Air Tawar Volume 4 No. 1 Mei 2007 (1-9) Tabel 7. Indeks Fagositosis (%) Selama selama Pemeliharaan Sebelum Infeksi Virus dan Setelah Infeksi Virus pada Uji Tantang PERLAKUAN ULANGAN SEBELUM INFEKSI SETELAH INFEKSI H 0 H +14 H +21 H+28 H +7 H +14 H +21 A ,33 14, ,67 21,333 29,67 25 B ,667 13, ,333 26,33 24,333 C ,67 11,67 13, ,67 22,667 D Keterangan: H0 : awal pemeliharaan H+14 : hari ke-14 H+21 : Hari ke-21 H+28 : hari ke-28 Penurunan aktivitas pagositik juga diduga karena jumlah sel neutrofil yang aktif mungkin mengalami penurunan, yang menurut (Tizard, 1988), kerja neutrofil cepat tetapi tidak tahan lama, sedangkan fagositik mononukear kerjanya lambat, dapat memfagositik berulang-ulang dan dapat mengolah antigen untuk proses tanggap kebal. Kematian Harian Selama Uji Tantang dan Sintasan setelah Uji Tantang ,33 9,667 12,67 13,33 10,333 15,33 20,333 Sintasan (%) Hari pengamatan Gambar 3. Grafik Kematian Harian Setelah Uji Tantang A B C D Grafik kematian selama uji tantang dapat dilihat pada Gambar 3. Berdasarkan Gambar 3, terlihat pada perlakuan A kematian terjadi mulai pada hari ke-9, B dan C pada hari ke-10 dan D (kontrol) pada hari ke-5. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian chromium yeast mampu meningkatkan daya tahan tubuh yang ditandai dengan meningkatnya jumlah leukosit dan indek fagositik. Data sintasan setelah uji tantang disajikan pada Tabel 8. Tabel 8. Sintasan Ikan Mas Setelah Uji Tantang (%) PERLAKUAN ULANGAN RERATA A ,66 ± 5,7773 c B ,33 ± bc C ± 10,000 b D ± 10,000 a 8

9 Tabel 8 menunjukkan bahwa perlakuan A menghasilkan sintasan tertinggi sebesar 76,66 ± 5,7773 % diikuti B 63,33 ± %, C 50 ± 10,000 % dan D 20,0000 ± 10,000%. Sintasan pada perlakuan A,B dan C berbeda nyata dengan perlakuan D (kontrol). Hal ini menunjukkan Cr yeast memberikan respon positif terhadap kelulushidupan ikan mas yang diinfeksi KHV. Kelulushidupan yang tinggi ini disebabkan adanya peningkatan daya tahan tubuh ikan mas yang ditandai meningkatnya jumlah total leukosit yang berfungsi sebagai pertahanan non spesifik dan adanya peningkatan indeks pagositosis. Anderson (1992), menyatakan leukosit merupakan salah satu komponen darah yang berfungsi sebagai pertahanan non spesifik yang akan melokalisasi dan mengeliminir patogen melalui pagositosis. Meningkatnya indeks pagositosis menunjukkan adanya peningkatan kekebalan tubuh, sebagaimana diungkapkan Brown (2000), yang menyatakan peningkatan kekebalan tubuh dapat diketahui dari peningkatan aktivitas sel fagosit dari hemosit. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Pemberian Cr yeast memberikan respon positif terhadap peningkatan daya tahan tubuh ikan mas. Pemberian Cr yeast terbukti mampu meningkatkan sintasan ikan mas yang diinfeksi virus KHV. Saran Perlu dilakukan pengujian penggunaan Cr yeast pada KJA ukuran 7x7x7m3 di beberapa pembudidaya sebelum didiseminasikan ke masyarakat. DAFTAR PUSTAKA Amrullah Penggunaan Immunostimulan Spirulina platensis Untuk Meningkatkan Ketahanan Tubuh Ikan Koi (Cyprinus carpio) Terhadap Virus Herpes. Tesis S2. Program Pasca Sarjana Institute Pertanian Bogor. 101 hal Anderson DP Fish Imunlogi. TFH Publication Ltd Hongkong. 239 ps Anderson, Immunostimulants, Ajduvants and Vaccine Carrier in Fish: Application to Aquaculture. Ann. Rev. Fish Dis 2: Baratawidjaya KG Imunologi Dasar. Fakultas Kedoktern Hewan Universitas Indonesia, Jakarta. 217 ha,. Bond, Biology of Fishes. W.R Saunders, Philadelphia, London Toronto Brown KMT Applied Fish Pharmacology. Kluwer Academic Publisher. Netherland.309 ps Ellis, A.E General Principle of Fish Vaccination. Academic Press. London. Ferguson, H.W Normal Structure and FUcntions. Fish Disease Refresher Course for Veterinarians Proc. 106: Fletcher TC, Non Spesific Defence Mechanism of Fish. Developmental Comparative Immunology 2 : Gudkovs, N Fish Immunology. Fish Disease Refresher Course for Veterinarians. Proc. 106: Harris E Short Notes on The Application of Running Water Systems in Carp Culture in West Java Submitted to The Workshop on Aquaculture Financing. Jakarta. 6 hal Kwang L.C Immune Enhancer in The Control of Diseae in Aquaculture. Encap Technology Pte Ltd, Singapore Ornamental Aquatic Trade Association (OATA) Koi Herpes Virus (KHV). United Kingdom. 33 ps. Randall D.J The Circulatory System. In Fish Physiology ed: W.S Hoar, D.J Randall. Vol 4 London Academic Press p: Rastogi, S.C Essential of Animal Physiology. Willley Easterm Limited, New Delhi, Bangalore, Bombay, Calcuta p : Saptiani,G Gambaran Sistem Kekebalan Non Spesifik pada Ikan Gurame (Osphronemus gouramy) akibat Pemberian Immunostimulan. Program Pasca Sarjana IPB. Bogor. 60 hal. Spector, WG An Introduction to General Pathology. Third Edition. Churcill Livingstone, London. 391 ps Tizard I An Introduction to Veterinary Immunology. Second Ed. WB. Saunders Company. Philadelphia. 363 ps Walczak BZ Immune Capability of Fish. A Literatur Review. Canadian Technical Report of Fisheries and Aquatic Science 1334: 1-33 Wedemeyer G.A dan Yasutake WT Clinical Methods for the Assesment of the Effect Environmental Stress on Fish Health. Technical Papers of the U.S. Fish and Wildlife Service. Us. Departement of the Interior 89: