PERSETUJUAN PEMBIMBING

Transkripsi

1 PERSETUJUAN PEMBIMBING Jurnal yang Berjudul UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN API-API (Avicennia marina ) TERHADAP BAKTERI (Staphylococcus aureus dan Escherchia coli) Oleh : NUR RISCAH MANGGA Telah Diperiksa dan Disetujui Oleh Pembimbing 1 Pembimbing 2 Dr. Lintje Boekoesoe, M.Kes Moh. Adam Mustapa, S.Si.,M.Sc NIP NIP : Mengetahui Ketua Program S1 Farmasi Dr. Widysusanti Abdulkadir, M.Si.,Apt NIP :

2 UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN API-API (Avicennia marina) TERHADAP BAKTERI (Staphylococcus aureus dan Escherichia coli) Nur Riscah Mangga, Lintje Boekoesoe, Mohammad Adam Mustapa 1 *) Jurusan Farmasi, Program Studi S1 Farmasi, Fakultas ilmu-ilmu kesehatan dan keolahragaan, Universitas Negeri Gorontalo, Nurriscah@gmail.com ABSTRAK Tanaman bakau Avicennia marina yang dikenal memiliki senyawa sebagai antibakteri umumnya dimanfaatkan oleh masyarakat pesisir yaitu sebagai bahan makanan, bioformalin, sebagai obat. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun apiapi (Avicennia marina) terhadap pertumbuhan bakteri. Ekstraksi yang dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol selama 3x24 jam, dan dilanjutkan dengan uji skrining fitokimia. Pengujian antibakteri menggunakan metode difusi agar menggunakan bakteri uji (Staphylococcus aureus dan Escherchia coli). Hasil uji dibandingkan dengan tabel klasifikasi respon hambatan menunjukkan pada konsentrasi 5% sampai konsentrasi 45% menunjukkan adanya respon hambatan pada bakteri uji Staphylococcus aureus. Pada konsentrasi 45% rata-rata diameter zona hambat sebesar 18 mm. Sedangkan pada bakteri uji Escherchia coli dari konsentrasi 5% tidak menunjukkan respon hambatan. Tetapi pada konsentrasi 15% sampai 45% menunjukkan adanya respon hambatan. Kesimpulan: Ekstrak metanol daun Avicennia marina menunjukkan adanya aktivitas sebagai antibakteri tetapi lebih sensitif terhadap bakteri gram positif. Kata kunci : Antibakteri, Avicennia marina, Staphylococcus aureus, Escherichia coli PENDAHULUAN Banyaknya penyakit infeksi yang diderita oleh sebagian masyarakat semakin banyak pula kebutuhan akan antibiotik. Pada realita saat ini pasien kadang tidak memperhatikan pemakaian antibiotik yang mengakibatkan antibiotik resisten terhadap mikroba. Penggunaan antibiotik yang tidak rasional dapat membuat mikroba patogen menjadi resisten (Rahmi, 2013). Adanya resistensi oleh patogen dengan antibiotik modern maka dari itu diperlukan keahlian mencari, mendesain dan mengembangkan obat baru dari produk tumbuhan alami untuk mengendalikan infeks mikroba. Obat tradisional digunakan secara turun-temurun untuk mengobati berbagai penyakit, salah satu penyakit yang disebabkan oleh mikroba patogen yaitu penyakit infeksi. Penyakit infeksi pada jaringan kulit yang umumnya menyerang masyarakat disebabkan oleh berbagai miroba (Sintia, 2013). Mikroorganisme patogen yang paling umum berperan dalam infeksi kulit sala satunya adalah Staphylococcus aureus dan Escherichia coli yang menyebabkan diare (Pratiwi, 2008). 1 Nur Riscah Mangga, Dr Lintje Boekoesoe M.kes. Moh Adam Mustapa S.Si.,M.sc 1

3 Tanaman bakau merupakan pilihan terbaik untuk mengisolasi produk alami bioaktif terhadap mikroba khususnya bakteri. Indonesia merupakan negara kepulauan yang kaya akan berbagai spesies tanaman termasuk tanaman bakau yang berada di pesisir pantai. Tumbuhan bakau (mangrove) memiliki banyak manfaat bagi kehidupan antara lain manfaat ekologi, pangan, dan obat. Tumbuhan bakau secara turun temurun dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai bahan berkhasiat obat. Sebagian besar dari tumbuhan mangrove digunakan sebagai bahan obat (Purnobasuki, 2005). Mangrove (tumbuhan bakau) menempati area yang luas di sepanjang pesisir pantai Indonesia yaitu 2500 km 2 atau mencapai 25% dari total luas hutan mangrove diseluruh dunia (Mufida 2013). Hal ini termasuk dikawasan propinsi Gorontalo yang sebagian besar memiliki hutan mangrove yang sangat luas khususnya di daerah Pohuwato. Penelitian sebelumnya yang telah dilakukan oleh syafi ul dan Rita (2012) tentang ekstrak daun api-api (Avicennia marina) untuk pembuatan bioformalin sebagai antibakteri ikan segar menunjukan bahwa ikan bandeng yang diberi bioformalin lebih awet dari ikan bandeng yang hanya diolesi dengan air. Bioformalin dibuat dengan menggunakan sampel daun api-api dengan metode infudasi. Hal ini dilihat bahwa mangrove jenis Avicennia marina memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Berdasarkan pernyataan diatas maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai Uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun api-api (Avicennia marina) terhadap pertumbuhan bakteri. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Peralatan yang digunakan adalah gelas kimia, gelas ukur, gelas ukur, inkubator, autoklaf, neraca anlitik, oven, mikropipet, tabung reaksi, labu erlenmeyer, rotary evaporator, cawan poselin, cawan petri, pipet, pinset, jarum ose, hot plate, vortex, lampu bunsen, jangka sorong, botol kaca, botol vial, batang pengaduk. Bahan yang digunakan adalah aluminium foil, aquadest, bakteri, jamur, ekstrak daun apiapi, etanol 75%, metanol, media Natrium agar, Natrium broth, kertas cakram, kertas saring wathman, kapas, tissu, label, kontrol positif eritromisin Prosedur Kerja Penelitian ini adalah penelitian Eksperimental laboratorium. Sampel penelitian ini menggunakan bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherchia coli yang diambil dari biakan di Lab Mikrobiologi Farmasi. Alat-alat yang digunakan disterilkan dalam oven pada 2

4 suhu C selama ± 1 jam. Media disterilkan dalam autoklaf pada suhu C selama 15 menit. Pengambilan sampel daun api-api Avicennia marina di habitat hutan mangrove Desa Bumbulan Kecamatan Paguat, Provinsi Gorontalo. Sampel daun api-api dibersihkan dan dicuci dengan air yang mengalir kemudian di rajang dan dikeringkan. Daun Avicennia marina yang sudah kering ditimbang 250 gram dimaserasi selama 24 jam dengan metanol sebanyak 3 kali pada suhu kamar. Setelah di ekstrasi selama 3 x 24 jam ekstrak yang diperoleh ekstrak kental kemudian dihitung presentasi rendamen yaitu: Sampel dari ekstrak daun mangrove apiapi yang dibuat dengan beberapa konsentrasi yaitu 5% b/v, 15% b/v, 25% b/v, 35% b/v, 45% b/v konsentrasi masingmasing dengan volume 10 ml. Pengujian Aktivitas Antimikroba Pengujian aktivitas antimikroba ekstrak daun api-api dilakukan dengan metode difusi agar. Jarum ose dipanaskan di ambil satu ose bakteri uji dari hasil biakan dan digores pada media yang berisi Natrium agar. Kertas cakram dengan ukuran 5 mm di tetesi ekstrak yang telah di encerkan dengan berbagai konsentrasi satu persatu menggunakan mikropipet sebanyak 15µl, kemudian di tanam dengan menggunakan pinset steril satu persatu pada media agar agak ditekan-tekan dalam cawan petri yang telah di inkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C. Pengamatan dilakukan dengan cara menghitung diameter zona hambat dengan menggunakan jangka sorong SkriningFitokimia Kandungan fitokimia bagian-bagian mangrove di analisis menggunakan metode Harbone (1998) dan Trease dan evan (2002) dalam Awaludin et all (2011) untuk metode pengujian triterpen yaitu ekstrak 0,5 g ditambahkan 2 ml kloroform dan asam sulfat 3 ml ditambahkan, reaksi positif ditandai dengan terbentuknya larutan berwarna merah pertama kali kemudian berubah menjadi biru dan hijau. Teknik Pengumpulan Data. Pengukuran yang ada dibandingkan dengan klasifikasi respon hambatan pertumbuhan bakteri yang ditunjukan pada tabel klasifikasi respon hambatan bakteri menurut Greenwood, 1995 dalam Rinawaty, 2010). 3

5 Tabel 1. Klasifikasi Respon Hambatan Pertumbuhan Bakteri Diamter zona terang Respon hambatan pertumbuhan 10 mm Tidak ada hambatan mm Lemah mm Sedang 20 mm Kuat Pada pengujian aktivitas antibakteri triterpenoid dan ditunjukkan warna data hasil pengukuran zona merah dengan penambahan kloroform pengukuran dirata-ratakan dan dan asam sulfat. Berdasarkan hasil dibandingkan dengan klasifikasi penelitian yang dilakukan Ravikumar respon serta dianalissi dengan et al (2011) dalam Mufida (2013) metode deskriptif dalam bentuk menunjukkan bahwa senyawa tabel dan gambar. terpenoid terkandung dalam jumlah HASIL DAN PEMBAHASAN banyak pada ekstrak Avicennia Pada penelitian ini hasil rendamen marina. Dan pada penelitian Sintia et dari perbandingan berat awal dan berat al (2013) menunjukkan adanya ekstrak kental yaitu didapatkan senyawa triterpenoid yang beraktifitas 14,68% seperti yang terlihat pada tabel sebagai antibakteri. Menurut Bagus et all (2014) senyawa terpenoid dapat Tabel 2. Rendamen Ektrak Daun Api-Api menghambat pertumbuhan dengan Berat Metanol Berat Rendamen mengganggu proses terbentuknya sampel (ml) ekstrak (%) membran dan atau dinding sel, (gr) membran atau dinding sel tidak ml 36,70 gr 14,68 % terbentuk atau tidak terbentuk gram sempurna. Hasil uji skrining fitokimia Dari hasil penelitian tentang menunjukkan sampel daun api-api Aktivitas antibakteri ekstrak daun mengandung senyawa terpenoid. Pada Avicennia marina terhadap bakteri penelitian ini hasil uji skrining Staphylococcus aureus adan fitokimia positif mengandung Escherchia coli sebagai berikut. 4

6 Tabel 3 Diameter Zona Hambat Bakteri Staphilococcus aureus dan Escherchia coli Diameter Zona Hambat (mm) Rata- Bakteri Perlakuan Replikasi rata Ket (mm) Staphilococcus Escherchia coli aureus Konsentrasi 5% Ada Konsentrasi 15% ,6 Ada Konsentrasi 25% Lemah Konsentrasi 35% Sedang Konsentrasi 45% Sedang Konsentrasi 5% Tidak ada Konsentrasi 15% Ada Konsentrasi 25% Ada Konsentrasi 35% ,6 Ada Konsentrasi 45% Lemah Kontrol Negatif Tidak ada Kontol positif Kuat Berdasarkan tabel diatas hasil yang diperoleh dari pengujian aktivitas antimikroba ekstrak metanol daun Avicennia marina menunjukkan adanya hambatan terhadap bakteri, pada pengujian bakteri Staphylococcus aureus menunjukkan adanya rata-rata diameter zona hambat setiap konsentrasi berbeda-beda, yaitu pada konsentrasi 5% dan 15% memiliki ratarata diameter zona hambatan 8 mm dan 9,6 mm. Berbeda pada konsentrasi 25% memilki rata-rata diameter zona hambat 12 mm,dan pada konsentrasi 35% dan 45% diameter rata-rata zona hambat yang terbentuk yaitu 16 mm dan 18 mm. Hal ini menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi semakin besar pula adanya zona hambat disebabkan. Sedangkan pada kontrol negatif tidak terlihat adanya zona hambat hal ini menunjukkan kontrol negatif metanol tidak beraktivitas sebagai antibakteri karena dalam prosedur kontrol negatif metanol di biarkan menguap. Tetapi sebaliknya pada kontrol positif menggunakan eritromisin menunjukkan adanya diameter rata-rata zona hambat yang masuk dalam range klasifikasi respon 5

7 yang kuat yaitu 20 mm. Pada bakteri uji Staphylococcus aureus semakin tinggi konsentrasi diamter zona hambat semakin besar pula. Perhatikan gambar dibawah ini. Gambar 1 Rata-rata diameter zona hambat (mm) Bakteri S.aureus Kontrol Negatif Konsentrasi 5% konsentrasi 15 % Konsentrasi 25% Konsentrasi 35% Konsentrasi Kontol Positif 45 % Dari gambar diatas dapat dilihat bahwa aktifitas antimikroba semakin tinggi konsentrasi semakin besar ratarata diameter zona hambat semakin mendekati kontrol positif. Pada pengujian bakteri Escherchia coli zona hambat yang terlihat mulai pada konsentrasi 15% sedangkan pada konsentrasi 5% tidak menunjukkan adanya zona hambat hal ini di sebabkan senyawa yang terkandung dalam ekstrak Avicennia marina dalam jumlah kecil tidak dapat menghambat bakteri gram negatif karena diduga senyawa antibakteri yang terkandung dalam ekstrak dalam konsentrasi minimum belum berefek pada bakteri gram negatif. Berbeda pada konsentrasi 15%, 25%, dan 35% menunjukkan adanya aktivitas sebagai antibakteri dengan zona bening yang terbentuk masingmasing 4 mm, 7 mm, dan 8,6 mm hingga pada konsentrasi 45% memiliki zona hambatan sebesar 11 mm yang masuk pada range klasifikasi. Tetapi dalam hal ini tidak di kategorikan memiliki aktivitas antibakteri yang kuat. Karena diduga senyawa dalam ekstrak lebih sensitif terhadap bakteri positif. Perhatikan gambar 2 Untuk zona hambatan kontrol positif Eritromisin memiliki respon hambatan dengan diamter rata-rata sebesar 20 mm dalam klasifikasi respon hambatan termasuk klasifikasi antimimikroba yang kuat. Sedangkan kontrol negatif menggunakan metanol tidak terbentuk zona hambat sama sekali. 6

8 Gambar 4.2 Rata-rata diameter zona hambat (mm) Bakteri E.coli Kontrol Konsentrasi konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Kontol Negatif 5% 15 % 25% 35% 45 % Positif Dari gambar 2 diatas dapat dilihat bahwa aktifitas antimikroba semakin tinggi konsentrasi semakin besar ratarata diameter zona hambat tetapi pada konsentrasi 5% tidak terlihat zona hambat. Berdasarkan gambar 1 dan 2 kontrol positif lebih besar dari pada konsentrasi ekstrak hal ini di duga ekstrak Avicennia marina mengandung senyawa yang bersifat bakteriostatik. Berdasarkan penelitian Bagus et all (2014) Avicennia marina lebih bersifat bakteriostatik. Di dalam ekstrak ini juga masih ada beberapa campuran senyawa seperti yang diungkapkan oleh (Wibowo, 2009) ekstrak daun mangrove Avicennia marina banyak ditemukan senyawa-senyawa aktif meliputi flavonoid, alkaloid, terpenoid, tannin, dan saponin daripada kulit, batang, getah, akar dan buah. Tidak seperti halnya kontrol positif eritromisin yang sudah tentu mengandung senyawa murni yaitu zat antibiotik yang dihasilkan oleh suatu strain Streptomyces erythreus. Sehingga antibiotik eritromisin lebih memiliki zona hambat lebih besar dibandingkan ekstrak karenamerupakan antibiotik spektrum luas aktif terhadap bakteri gram positif maupun gram negatif dan bersifat bakteriostatik maupun bakterisid. Eritromisin merupakan antibiotik golongan makrolida yang mampu menghambat sintesis protein. Antibiotik yang memiliki mekanisme kerja menghambat sintesis protein mempunyai daya antibakteri sangat kuat (Bagus, 2014). Dari kedua uji bakteri dengan beberapa replikasi dapat dilihat bahwa pengujian menggunakan bakteri Staphylococcis aureus lebih besar ratarata zona hambat yang terbentuk dibandingkan pada pengujian 7

9 menggunakan bakteri Escherchia coli. Hal ini disebabkan karena struktur penyusun kedua bakteri ini berbeda terutama pada dinding sel dan juga Menurut V.Umamaheswara et all (2012)ekstrak metanol Avicennia marina lebih aktif pada bakteri gram positif. Kandungan pada membran terluar dinding sel bakteri gram negatif berbeda dengan bakteri gram negatif Staphylococcus aureus memiliki struktur dinding sel yang mengandung lipid yang rendah (1-4%) sedangkan bakteri gram negatif berlapis tiga dengan kandungan lipid (11-22%) (Pratiwi, 2008). KESIMPULAN Ekstrak daun api-api menunjukkan adanya aktivitas antibakteri menggunakan dua bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus dan Escherchia coli. Aktivitas antibakteri sudah terlihat pada konsentrasi 5% menggunakan bakteri uji Staphylococcus aureus menunjukkan adanya zona hambat. Rata-rata zona hambat yang terbentuk masuk dalam klasifikasi respon hambatan, berturut-turut mendekati control positif 20 mm. Tetapi berbeda pada pengujian menggunakan bakteri uji Escherchia coli daerah zona hambatan terlihat pada konsentrasi 15% sedangkan konsentrasi 5% tidak menghasilkan daerah zona hambatan. Hal ini didasarkan pada perbedaan struktur penyususun kedua strain bakteri tersebut. DAFTAR PUSTAKA Adila, Rahmi dkk Uji Antimikroba Curcuma spp. Terhadap Pertumbuhan Candida albicans, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Jurnal. Kampus UNAND Limau Manis Padang: Padang Awaludin, asep dkk Penapisan Fitokimia dan antibakteri ekstrak metanol mangrove (Excocaria agallocha) dari muara sungai porong. Jurnal. Universitas Brawijaya: Malang Bagus, Adrianus Krisnata dkk Daya Hambat Ekstrak Daun Mangrove (Avicennia marina) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Mixed periodontopatogen. Jurnal Vol 8 No 1. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Hang Tuah: Surabaya Pratiwi Sylvia T Mikrobiologi Farmasi. Erlangga: Yogyakarta Purnobasuki H Potensi Mangrove Sebagai Tanaman Obat. Biota Vol IX Rinawaty, Nanin Dwi Daya antibakteri tumbuhan majapahit terhadap bakteri vibrio alginolyticus. Skripsi (online). 8

10 Institut teknologi sepuluh November: Surabaya Sintia dkk senyawa triterpenoid dari batang tumbuhan mangrove Avicennia marina yang beraktivitas anti bakteri. Jurnal. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran: Bandung Syafi ul Rofik dkk Ekstrak daun api-api (avecennia marina) untuk pembuatan Bioformalin sebagai antibakteri ikan segar. Jurnal. Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik UNWAHAS Wibowo, dkk Pemanfaatan pohon mangrove api-api (Avicennia spp.) sebagai bahan pangan dan obat. /handle/ /45052/pemanfa atan%20pohon%20mangrove.pdf? sequence=1. Diakses tanggal 5 Juni Windayu, Mufidah Elfa Aktivitas Antimikroba Kulit Batang Kayu Api-api Betina (Avicennia marina) terhadap Bakteri dan Fungi Patogen secara In Vitro. Skripsi online. IPG: Bogor V.Umamaheswara dkk Antibacterial activity of leaf and stem extracts of Avicennia marina L. Journal Vol.5. Acharya Nagarjuna University 9

11 10