PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2014

Transkripsi

1 PENGEMBANGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI PADA PENETAPAN KADAR SIMVASTATIN TABLET MENGGUNAKAN FASE GERAK ASETONITRIL : AIR SKRIPSI OLEH: DIFA ANANDA NIM PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2014

2 PENGEMBANGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI PADA PENETAPAN KADAR SIMVASTATIN TABLET MENGGUNAKAN FASE GERAK ASETONITRIL : AIR SKRIPSI Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi OLEH: DIFA ANANDA NIM PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2014

3 PENGESAHAN SKRIPSI PENGEMBANGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI PADA PENETAPAN KADAR SIMVASTATIN TABLET MENGGUNAKAN FASE GERAK ASETONITRIL : AIR OLEH: DIFA ANANDA NIM Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Pada Tanggal: Juli 2014 Pembimbing I, Panitia Penguji, Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt. NIP Prof. Dr. Siti Morin S, M.Sc., Apt. NIP Pembimbing II, Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt. NIP Prof. Dr. rer.nat. E. De Lux Putra, SU., Apt. NIP Prof. Dr. Jansen Silalahi, M.App.Sc., Apt. NIP Dra. Sudarmi, M.Si., Apt. NIP Medan, Juli 2014 Fakultas Farmasi Dekan, Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. NIP

4 KATA PENGANTAR Alhamdulillah, segala puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat, karunia dan ridhonya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang berjudul Pengembangan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Pada Penetapan Kadar Simvastatin Tablet Menggunakan Fase Gerak Asetonitril : Air. Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi. Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih yang tulus dan ikhlas kepada Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi yang telah memberikan fasilitas sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan. Bapak Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt., dan Bapak Prof. Dr. rer.nat. Effendy De Lux Putra, SU., Apt., selaku pembimbing yang telah memberikan waktu, bimbingan dan nasehat selama penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini. Ibu Prof. Dr. Siti M. Sinaga, M.Sc., Apt., Ibu Dra. Sudarmi, M.Si., Apt., dan Bapak Prof. Dr. Jansen Silalahi, M.App.Sc., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan saran, arahan, kritik, dan masukan kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan. Selain itu, penulis juga mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang tiada terhingga kepada Ayahanda Effendy A.S. dan Ibunda Adja Fauziah B.A tercinta, kedua mertua dan istriku Sri Widya Astuti S.S tercinta, anakku Fathir tercinta sebagai penyemangat yang tiada hentinya berkorban dengan tulus ikhlas iv

5 bagi kesuksesan penulis, juga kepada kakak, abang, dan teman-teman mahasiswa Farmasi khususnya Farmasi Ekstensi 2011 yang selalu memberi doa, dorongan, dan motivasi selama penulis melakukan penelitian. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih belum sempurna, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk penyempurnaannya. Harapan saya semoga skripsi ini dapat bermanfaaat bagi ilmu pengetahuan kefarmasian. Medan, Juli 2014 Penulis, Difa Ananda NIM v

6 PENGEMBANGAN METODE KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI PADA PENETAPAN KADAR SIMVASTATIN TABLET MENGGUNAKAN FASE GERAK ASETONITRIL : AIR ABSTRAK Simvastatin merupakan obat antihiperlidemia yang termasuk golongan penghambat HMC-CoA reduktase. Monografi sismvastatin tablet tidak terdapat pada Farmakope Indonesia edisi IV, tetapi pada USP 32 tahun 2009 penetapan kadar simvastatin dalam sediaan tablet ditentukan secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan fase gerak asetonitril : buffer asetat dengan sistem isokratik, sedangkan pada penelitian sebelumnya menggunakan fase gerak asetonitril : air dengan sistem elusi gradien. Adapun kelemahan dari kedua metode tersebut adalah pemakaian buffer yang tidak ramah terhadap kolom dan pemakain sistem elusi gradien yang rumit. Tujuan penelitian ini adalah pengembangan metode penetapan kadar simvastatin tablet secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) yang lebih aman terhadap kolom dan relatif lebih mudah digunakan. Penetapan kadar simvastatin tablet dilakukan dengan sampling purposif dengan menggunakan dua sediaan tablet generik dan dua sediaan tablet nama dagang. Penelitian ini menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm), fase gerak asetonitril : air berbagai perbandingan dengan sistem elusi isokratik, laju alir 1,5 ml/menit, suhu kolom 50ºC dan panjang gelombang 238 nm. Optimasi dilakukan dengan mengubah komposisi fase gerak asetonitril : air untuk mendapatkan hasil yang terbaik secara KCKT dengan parameter tailing factor, waktu retensi, nilai lempeng teori dan resolusi. Untuk menguji validitas metode ini, dilakukan uji validasi dengan parameter akurasi, presisi, batas deteksi dan batas kuantitasi. Hasil pengembangan metode dengan menggunakan sistem elusi isokratik diperoleh fase gerak yang paling baik dengan perbandingan asetonitril : air (80:20). Hasil uji validasi diperoleh % recovery 99,67%, presisi (RSD) 1,89%, ini menunjukkan bahwa metode ini memiliki akurasi dan presisi yang baik dengan batas deteksi (LOD) 2,314 µg/ml dan batas kuantitasi (LOQ) 7,713 µg/ml. Dari hasil penetapan kadar simvastatin dalam sediaan tablet diperoleh berturut-turut kadar dari yang tercantum di etiket untuk nama dagang Ethicol 100,58 ± 0,17%, Selvim 99,45 ± 1,23% dan dengan nama generik Dexa Medica 100,67 ± 0,02%, Bernofarm 101,70 ± 0,06%. Dapat disimpulkan bahwa semua sampel tablet simvastatin memenuhi persyaratan kadar menurut United Stated Pharmacopeia (USP) 32 tahun 2009 yaitu tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket. Kata kunci:pengembangan metode, Validasi, Simvastatin, Tablet, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, Isokratik. vi

7 METHOD DEVELOPMENT HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ASSAY OF SIMVASTATIN TABLETS IN USING MOBILE PHASE ACETONITRILE : WATER ABSTRACT Simvastatin is a drug that belonged to antihiperlidemia HMC-CoA reductase inhibitors. In the fourth edition of the Pharmacopoeia of Indonesia the sismvastatin s tablet monograph is not available, but it is available in United States Pharmacopeia (USP) 32:2009. The assay of simvastatin tablet in the USP determined by high performance liquid chromatography (HPLC) using a mobile phase of acetonitrile: acetate buffer with an isocratic system, whereas in the previous study using a mobile phase of acetonitrile : water with gradient elution system. The limitation of both methods is the use of buffer that is not friendly to the column and the complication of gradient elution system usage. The purpose of this research is the development of HPLC assay method for simvastatin tablet where is more secure against column and relatively easy to use, this method is validated and is further applied to the determination of concentrations of simvastatin in tablet using generic and trade name as the sampels. The Assay has been developed using a Waters X-Bridge column (250 x 4.6 mm), mobile phase of acetonitrile: water with isocratic elution system, a flow rate of 1.5 ml/min, column temperature 50ºC and a wavelength of 238 nm. In this study the optimation of this assay is done by changing the compotition of mobile phase to gain the best result of analysis. The validation parameters such as accuracy, precision, limit of detection and limit of quantitation is also performed. This study shows the best result of simvastatin assay with a retention time of 2.7 minutes from isocratic elution system using acetonitrile : water (80:20) as the mobile phase. The validation test shows the % accuracy (recovery) and precision (RSD) of 99.67% and 1.89% respectively, indicating that the method has good accuracy and precision. The limits of detection (LOD) and limits of quantification (LOQ) is found to be µg/ml and µg/ml respectively. The determination using the developed procedure result concentration of simvastatin of ± 0.17% for Ethicol, ± 1.23% for Selvim, the ± 0.02% for Simvastatin generic from Dexa Medica, ± 0.06% for Simvastatin generic from Bernofarm. It can be concluded that all samples meet the requirement of the concentration of simvastatin in tablet according to the USP 32:2009, no less than 90.0% and not more than 110.0% of the amount listed on the label. Keyword:Method development, Validation, Simvastatin, Tablet, High Perfomance Liquid Chromatography, Isocratic. vii

8 DAFTAR ISI JUDUL Halaman i HALAMAN JUDUL... LEMBAR PENGESAHAN... KATA PENGANTAR... ABSTRAK... ABSTRACT... DAFTAR ISI... DAFTAR TABEL... DAFTAR GAMBAR... DAFTAR LAMPIRAN... ii iii iv v vi vii xii xiii xvi BAB I PENDAHULUAN Latar Belakang Perumusan Masalah Hipotesis Tujuan Penelitian Manfaat Penelitian... 5 BAB II TINJAUAN PUSTAKA Uraian Bahan Sifat Fisiko Kimia Simvastatin Mekanisme Kerja Efek Samping Teori Kromatografi... 8 viii

9 2.2.1 Sejarah Kromatografi Pemakaian Kromatografi Pembagian Kromatografi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Komponen Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Komponen KCKT Wadah Fase Gerak Pompa Injektor Kolom Detektor Alat Pengolah Data Fase Gerak Elusi Gradien dan Isokratik Parameter penting dalam KCKT Tinggi dan luas puncak Waktu tambat Faktor kapasitas Selektifitas Efisiensi kolom Resolusi Faktor asimetri Penentuan Kadar Simvastatin Secara KCKT Validasi Metode ix

10 2.5.1 Akurasi Presisi Spesifisitas Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Linearaitas Rentang Kekuatan BAB III METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian Alat-alat Bahan-bahan Sampling Tablet Simvastatin Prosedur Analisis Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Pembuatan Pelarut Penyiapan Alat KCKT Optimasi Komposisi Fase Gerak Analisis Kualitatif Analisis Kuantitatif Pembuatan Larutan Induk Baku I Simvastatin Pembuatan Larutan Induk Baku II Simvastatin Pembuatan Kurva Kalibrasi Penetapan Kadar Simvastatin Validasi Metode x

11 3.6.1 Akurasi Prosedur Akurasi Pembuatan Kurva Kalibrasi untuk Akurasi Presisi Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Analisis Data Secara Statistik BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Panjang Gelombang Analisis Optimasi Komposisi Fase Gerak Analisa Kualitatif Analisa Kuantitatif Kurva Kalibrasi Kadar Analit pada Sampel yang Dianalisis Hasil Uji Validasi BAB V KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN xi

12 DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Pengaruh Komposisi Fase Gerak Terhadap Parameter Kromatogram Tabel 2. Hasil Penetapan Kadar Simvastatin dalam Sediaan Tablet Tabel 3. Hasil Pengujian Validasi dengan Parameter Akurasi, Presisi, Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Simvastatin Pada Tablet Simvastatin Produksi Bernofarm dengan Menggunakan Metode Adisi Standar xii

13 DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Diagram Skematik Alat KCKT Gambar 2. Tipe Injektor dan Katup Putaran Gambar 3. Kurva serapan maksimum simvastatin BPFI dengan pelarut Asetonitril : air (80:20) Gambar 4. Kromatogram Sampel Ethicol secara KCKT menggunakan Kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan Fase gerak asetonitril : air (40:60), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 5. Kromatogram Sampel Ethicol secara KCKT menggunakan Kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan Fase gerak asetonitril : air (60:40), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 6. Kromatogram larutan simvastatin sebelum spiking secara KCKT menggunakan Kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:20), laju alir volume penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 7. Kromatogram larutan simvastatin sebelum spiking secara KCKT menggunakan Kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:20), laju alir volume penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 8. Kromatogram larutan simvastatin hasil spiking secara KCKT menggunakan Kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:20), laju alir volume penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 9. Kromatogram larutan baku seri simvastatin secara KCKT menggunakan Kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril:air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C xiii

14 Gambar 10. Kurva Kalibrasi Baku Simvastatin Gambar 11. Kurva Kalibrasi Baku Simvastatin untuk Validasi Metode Gambar 12.Kromatogram penentuan kurva kalibrasi secara KCKT menggunakan kolom Waters X- Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 13.Kromatogram hasil penentuan kurva kalibrasi untuk sampel Ethicol menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4, mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 14. Kromatogram hasil penyuntikan sampel simvastatin Produksi Dexa Medica secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan Fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl dan deteksi pada panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 15. Kromatogram hasil penyuntikan Selvim secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril: air (80:20), laju alir 1,5ml / menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl dan deteksi pada panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 16. Kromatogram hasil penyuntikan sampel tablet simvastatin Produksi Bernofarm secara KCKT menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril: air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl dan deteksi pada panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 17. Kromatogram hasil penyuntikan sampel Ethicol secara KCKT Menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl dan deteksi pada panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C xiv

15 Gambar 18. Kromatogram 1,2 dan 3 adalah sampel sebelum penambahan baku secara KCKT menggunakan kolom. Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan dan deteksi pada panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 19. Kromatogram 1,2 dan 3 adalah sampel sebelum penambahan baku secara KCKT menggunakan kolom. Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan dan deteksi pada panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 20.Kromatogram hasil penentuan kurva kalibrasi untuk validasi Metode menggunakan kolom Waters X-Bridge (250 x 4,6 mm) dengan perbandingan fase gerak asetonitril : air (80:20), laju alir 1,5ml/menit, volume penyuntikan 20 µl, penyuntikan 20 µl, panjang gelombang 238 nm dan suhu 50 C Gambar 21. Instrument KCKT (Shimadzu Prominence Series) Gambar 22. Instrument Spektrofotometer (Shimadzu UV 1800) Gambar 23. Heating Magnetic Stirrer (VELP) Gambar 24. Alat Ultrasonic SONICA Gambar 25. Pompa vakum (Boeco) Gambar 26. Neraca Analitik Presica Gambar 27. Micro Balance Mettler Toledo Gambar 28. ELGA Water Purification xv

16 DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Gambar Kromatogram Penentuan Kurva Kalibrasi Lampiran 2. Perhitungan Persamaan Regresi Simvastatin Lampiran 3. Gambar kromatogram penentuan kurva kalibrasi untuk sampel Ethicol Lampiran 4. Perhitungan persamaan kurva kalibrasi baku simvastatin Sampel Ethicol Lampiran 5. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel Tablet Simvastatin Produksi Dexa Medica Lampiran 6. Perhitungan Kadar Simvastatin Produksi Dexa Medica Lampiran 7. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel Tablet Simvastatin Produksi Dexa Medica Lampiran 8. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel Selvim Lampiran 9. Perhitungan Kadar Tablet Selvim Lampiran 10. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel Selvim Lampiran 11. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel Tablet Simvastatin Produksi Bernofarm Lampiran 12. Perhitungan Kadar Tablet Simvastatin Produksi Bernofarm Lampiran 13. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel Tablet Simvastatin Produksi Bernofarm Lampiran 14. Kromatogram Hasil Penyuntikan sampel Ethicol Lampiran 15. Analisis Data Secara Statistik dari Hasil Penyuntikan Sampel Ethicol Lampiran 16. Data Kadar Simvastatin dalam Sampel Lampiran 17. Kromatogram Analisis Perolehan Kembali Lampiran 18. Contoh Perhitungan Penimbangan Sampel xvi

17 Lampiran 19. Contoh Perhitungan untuk mencari Kadar Tablet Simvastatin Generik (PT. Bernofarm) Lampiran 20. Hasil Pengolahan Data Penetapan Kadar Simvastatin Lampiran 21. Gambar Kromatogram Penentuan Kurva Kalibrasi untuk Validasi Metode Lampiran 22. Perhitungan Persamaan Regresi Recovery Lampiran 23. Data Hasil Penyuntikkan Simvastatin Tablet Sebelum dan Sesudah Penambahan Analit Lampiran 24. Data Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Lampiran 25. Tabel Distribusi t Lampiran 26. Sertifikat Pengujian Baku Simvastatin Lampiran 27. Spesifikasi Sampel Lampiran 28. Gambar Alat yang digunakan xvii